Western Blot采用的是聚丙烯酰胺疑膠電泳，待檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。SDS-PAGE可對蛋白質樣品進行分離，轉移到固相載體，例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質，并保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。轉移后的NC膜就稱為一個印跡（blot）。用蛋白溶液（如5%BSA）處理，封閉NC膜上的疏水結合位點。用目標蛋白的抗體（一抗）處理NC膜（只有待研究的蛋白質才能與ー抗特異結合形成抗原抗體復合物），這樣清洗除去未結合的一抗后，只有在目標蛋白的位置上結合著一抗。用一抗處理過的NC膜再用標記的二抗處理（二抗是指一抗的抗體），處理后，帶有標記的形成抗體復合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白質的位置。

青蓮百奧蛋白組學FAQ電子書

成功關注【青蓮百奧】官方微信公眾號用戶

回復：蛋白FAQ+姓名+單位/課題組+郵箱+電話

即可免費領取電子書